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蝴蝶兰试管苗继代及生根培养的研究-园林工程苗木种植技术

时间 : 08-28 投稿人 : 文向园艺 点击 :

摘 要:以蝴蝶兰试管苗为试材进行了继代及生根培养基的研究,介绍了试验材料与方法,对试验结果进行了分析,通过两次试验对比得出结论:在蝴蝶兰的继代培养中3号培养基MS+BA5mg/L+NAA0.5mg/L+活性炭1.5g/L是最适合的;在生根培养中4号培养基MS+NAA1mg/L+活性炭1.5g/L是最好的。 关键词:蝴蝶兰;继代培养;生根培养;培养基蝴蝶兰(phalaenopsis)为兰科(Cymbidium)著名的盆栽观花植物。它清雅艳丽、花形如蝶、花期较长,具有很高的观赏价值,为热带兰中的珍品。 蝴蝶兰属单型茎的兰花,很少有侧芽萌发,靠自然无性繁殖,繁殖率极低,靠有性繁殖又因种子细小,不含为种子萌发提供营养的胚乳和其他组织,而且种子萌发还需要共生菌滋养,所以在自然条件下很难萌发。 近年来,随着人民物质文化生活的提高和东西方文化交流的加强,蝴蝶兰更受到人们的喜爱。只依靠传统的营养繁殖已经不能满足市场需求,而组织培养技术可以不受时间的限制进行周年生产,在不改变母本性的基础上还能去除病毒、真菌和细菌等病害,日益成为工厂化生产蝴蝶兰的主要手段。因此研究蝴蝶兰的组织培养及相关技术,对于我国花卉业的发展是非常有必要的。 在蝴蝶兰组织培养技术方面,国内外都有一定的研究。为了充分准备试验,笔者参考了国内外蝴蝶兰组织培养研究的现状,设计了这次试验,目的是研究MS培养基中不同浓度的激素(BA,NAA)对于不同品种的蝴蝶兰继代及生根培养的影响,最终找出一个最佳培养基。 1材料与方法 1.1材料 沈阳农业大学园林花卉实验室提供的无菌试管苗。 1.2材料准备 由于所提供的试管苗的数量有限,无法满足试验需要,所以在1月23日对现有的试管苗进行继代、扩繁。 1.2.1培养基的制备 经过40天的培养,无菌试管苗的数量已满足需要,准备进入正式试验阶段。为了方便比较、选择,第一次试验配制了3个继代培养基,每个配方中的激素比(BA/NAA)分别为100,50,10,并依次编号为1号、2号、3号;一个生根培养基编号为4号。各配方中均加入蔗糖30g/L、琼脂6.5g/L、活性炭1.5g/L,pH值为6.2。第二次试验也配制了3个继代培养基,每个配方中的激素比都是10,并且沿用第一次试验中的3号培养基,依次编号为5(3)号、6号、7号,一个生根培养基为8号,除8号培养基不加活性炭外,其他都和第一次试验一样。 首先,称取蔗糖30g、琼脂6.5g、活性炭1.5g各4份,通过计算量取每个配方所需药品,分别倒入编好号的广口瓶中。将蔗糖和琼脂各一份放入一大烧杯,加入700mL~800mL蒸馏水,开始加热并不停地搅拌,等到琼脂完全溶解,烧杯内再无其他杂物时,停止加热。稍后加入一份量好的母液和激素并用蒸馏水洗3~5次倒入大烧杯,然后用蒸馏水定容并搅动再用pH试纸调pH值为6.2,最后加入一份活性炭搅拌均匀,准备分装。其他培养基也如此配制,每瓶倒入1cm深的培养基后进行封口。现把两次试验所用培养基配方列举如下: 1号:MS+BA5mg/L+NAA0.05mg/L+活性炭1.5g/L; 2号:MS+BA5mg/L+NAA0.1mg/L+活性炭1.5g/L; 3(5)号:MS+BA5mg/L+NAA0.5mg/L+活性炭1.5g/L; 4号:MS+NAA0.1mg/L+活性炭1.5g/L; 6号:MS+BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L+活性炭1.5g/L; 7号:MS+BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+活性炭1.5g/L; 8号:MS+NAA1mg/L。 1.2.2培养及接种所需器具的准备 将分装封口后的培养基放入高压灭菌锅,在121℃~122℃高温下压15min~20min,取出培养基,在其未完全冷却前轻轻晃动使活性炭在培养基中分布均匀。再将试验要用的镊子、刀、培养皿等工具用牛皮纸包好放入高压锅,在126℃高温下压30min以上。之后将凉了的培养基和工具用托盘放到无菌接种室,把要转接的无菌试管苗也放入无菌接种室,打开紫外灯关好门窗,2h~3h之后可以关闭紫外灯并打开超净工作台的风扇,15min~20min后方可入内。然后在超净工作台上进行无菌转接。将原球茎转接到继代培养基中,每瓶5棵,将强壮的小苗接到生根培养基上,每瓶5棵。将转接完的瓶用封口膜封好,切勿用手碰到瓶沿,封完的瓶写上标号就可以放在培养架上进行培养了。 1.2.3培养条件 将转接好的瓶放到培养架上,培养温度25℃~28℃,光照强度800Lx~200Lx,照明每天12h~16h。 2结果与分析 2.1蝴蝶兰继代培养的研究 2.1.1不同培养基对蝴蝶兰继代培养的影响 2.1.1.1不同培养基对2号蝴蝶兰继代培养的影响 把2号蝴蝶兰品种转接在试验1中的3种继代培养基上,每瓶接5个,经过40天的培养后调查其生长情况,见表1。 2号蝴蝶兰在试验1中原球茎的增殖率在3号培养基上表现最好,其次为1号、2号。但成苗数在1号培养基中要多一些。分析其原因是由于3号培养基中激素浓度比为10,比较适合蝴蝶兰原球茎的增殖。在1号培养基中激素浓度比为100,细胞分裂素(BA)起主导作用诱导芽的分化,使成苗数量增加。 为了进一步试验3号培养基,在试验2中沿用了3号培养基并保持其激素浓度比不变(BA/NAA=10)。另外配制了两种培养基,分别编号为5(3)、6、7号。将2号品种转接到5(3)、6、7号培养基中,每瓶接5个。培养40天后进行调查,其生长情况见表2。 从表2可以看出,5(3)号继代培养基在试验2中原球茎增殖率可高达112%,从数据上看6号、7号培养基的原球茎增殖率也略高于1号、2号培养基,但成苗率没有试验1的效果明显。分析其原因是因为试验2中的激素比都是10,细胞分裂素起不到主导作用,成苗量相对减少。由于培养苗的体内积存了一部分激素,使实际的激素浓度略高,从而使原球茎增殖量增高。 2.1.1.2不同培养基对3号蝴蝶兰继代培养的影响 把3号蝴蝶兰品种转接到试验1中的3种继代培养基上,每瓶接5个。经过40天培养后对其进行调查分析,结果见表3。 由表3可见,在试验1中3号蝴蝶兰在3号培养基中的原球茎增殖率最高,为136.8%,其次是1号培养基,为50%,在2号培养基中的球茎增殖率最小只有32%。成苗率是在1号培养基中最大,为52.6%。分析其原因是由于3号培养基中的激素比为10,适合原球茎增殖,激素比(BA/NAA)在一定范围内越大越有利于芽的分化。所以在1号培养基中成苗率较高。 在试验2中把3号品种转接到继代培养基5(3)号、6号、7号,每瓶接5个,培养40天后对其进行调查,生长情况见表4。 由表4可以看出,5(3)号培养基对3号品种的球茎增殖很适合,增殖率为133%。尽管5号、6号、7号培养基中的激素比都是10,但6号、7号培养基中的激素含量少,原球茎增殖的效果不如5号培养基明显,而且由于细胞分裂素(BA)在配方中起不到主导作用,所以3种培养基的成苗效果都不好。 2.1.2同一培养基对不同蝴蝶兰继代培养的影响 2.1.2.1试验1中培养基对不同蝴蝶兰继代培养的影响 为了更好地比较蝴蝶兰品种间的差异,在第一次试验中把2号、3号蝴蝶兰转接到3种培养基上,并摆放到同一培养架进行对比调查,其生长情况见表5。 由表5可以看出,1号培养基对两个蝴蝶兰品种所产生的影响各有不同,球茎增殖分别为64.8%和50%,但成苗率较好为86.9%和52.6%。对2号品种的原球茎增殖和成苗情况比对3号的要好。这主要是因为1号培养基中细胞分裂素(BA)占主导地位,促使苗生长,而且2号、3号品种间也存在着差异。2号培养基没有大的激素比(BA/NAA)诱导芽的分化,也不适合原球茎的增殖。3号培养基对于两个品种的原球茎增殖都很有效果,增殖率分别为129.7%和136.8%。 2.1.2.2试验2中培养基对不同蝴蝶兰继代培养的影响 为了找出一种最适合的继代培养基配方,设计了试验2。配方5(3)号、6号、7号中的激素比(BA/NAA)不变,将2号、3号蝴蝶兰转接到这3个培养基上,每瓶接5个。然后对比培养,40天后调查结果,见表6。 由表6可以看出,试验2的结果也证实了3号继代培养基适合于两个品种的蝴蝶兰。6号、7号培养基的激素含量明显少了许多,但是效果并不是明显低于试验1。分析原因是因为在试管苗体内已经积存了一部分激素,使实际激素含量略高。 2.2蝴蝶兰壮苗生根培养基的研究 2.2.1不同培养基对2号蝴蝶兰壮苗生根的影响 将2号品种中的成苗转接到4号、8号生根培养基上,培养40天之后对其进行调查,结果见表7。 由表7可以看出,4号生根培养基中加有活性炭粉,使培养基适合根的生长,生根率达到了96%,而且苗的长势也很好。在8号生根培养基中由于没有加入活性炭,不能为根的生长提供适合的生长环境,所以生根率只有26.7%。 2.2.2不同培养基对3号蝴蝶兰的影响 把3号蝴蝶兰的成苗转接到生根培养基中,每瓶接5棵。培养40天以后调查其生长结果,见表8。 由表8可知,3号品种的生根率在两种培养基中均比2号品种要小,这主要是由于种间差异所致。4号加活性炭的培养基中的根长得很健壮,每株都有3~5条根且以后生长也很好,8号培养基中没有加活性炭,根长得很短,每株上只有1~2条根。 3结论与建议 3.1结论 在蝴蝶兰试管苗继代和生根培养的试验中我们经过实际的对比、选择得出了以下结论: (1)3号培养基是最适合于蝴蝶兰继代培养的培养基。 (2)在壮苗生根的培养基中,加有活性炭的培养基更有利于苗的生长,而且在以后的培养中也是加活性炭的长势较好。 (3)在成苗培养中,激素浓度比(BA/NAA)在一定范围内越大越有利于诱导芽的分化,越有利于成苗。 3.2建议 (1)MS作为基本培养基,因其含有大量的营养物质能提供给培养物质快速生长所需的养分,所以在继代培养中增殖率和成苗率都很高。在以后的蝴蝶兰组培中采用MS为基本培养基。 (2)在继代培养的过程中,尝试在培养基中加入果汁,可以有效提高原球茎的诱导率,加快繁殖速度。 (3)在蝴蝶兰继代培养中,切块细小、分布稀疏的培养瓶内群体生长较慢,而切块大、分布密集的培养瓶内群体生长十分旺盛。培养时在每个瓶中多接几个培养苗,形成群体效应更有利于生长。 参考文献 [1]张秀珊.蝴蝶兰组培苗栽培技术[J].中国花卉园艺,2000(2):28-29. [2]王怀宇.蝴蝶兰快速无性繁殖[J].广东园艺学报,1989,16(1):73-77. [3]傅连芳.蝴蝶兰的快速繁殖[J].热带作物研究,1990(2):24-27. [4]李进进,廖俊杰,柯丽婉,等.蝴蝶兰根段组织培养[J].植物生理学通讯,2000,36(1):37. [5]杨美纯,周岐伟,许鸿源,等.外部因子对蝴蝶兰叶片原球茎状体发生的影响[J].广西植物,2000(1):42-46. [6]张秀清,王志武,王春英.蝴蝶兰实生苗原球茎状体诱导研究[J].莱阳农学院报,1995,12(1):44-46. [7]郭达初,刘克斌,柴明良.蝴蝶石斛兰、卡特兰、蝴蝶兰离体快繁[J].浙江农业学报,1991,3(1):34-38. 第一作者简介:朱红华,男,1978年7月生,2002年毕业于沈阳农业大学园林系,助教,辽宁省林业职业技术学院,辽宁省沈阳市苏家屯区枫杨路186号,110101。

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