百合是世界上著名的切花品种之一,靠常规的小鳞茎分株方法繁殖,繁殖系数较低,1株百合每年只能得到1～3个小鳞茎[1]。有些种类可用鳞片扦插繁殖,但往往容易腐烂。另外,百合长期靠营养繁殖,容易感染病毒病,而影响百合品质[2]。组织培养快速繁殖技术,能够迅速去除病毒和更新品种,具有较高的经济价值和开发潜力,因而得到广泛的应用。近年来,很多花卉研究者进行了百合的组织培养繁殖研究,所选的外植体有珠芽、幼茎段、叶片、鳞片等[3 6],主要侧重于不同外植体对百合成苗和脱毒效果的研究,而关于利用组培苗叶片基部进行快速繁殖和结鳞茎的研究,报道较少[7]。本试验以组培苗叶片基部为材料,对影响百合成苗和结鳞茎的两类主要激素进行了系统研究,省去了对外植体消毒处理的过程,减少了污染机率,为将来大规模生产百合小苗和鳞球茎在理论和实践上提供参考依据。
1 材料与方法
1.1 材料
采用的百合品种为麝香百合(ＬｉｌｉｕｍｌｏｎｇｉｆｌｏｒｎｍＴｈｕｍｂ),英文名字为Ｅａｓｔｅｒｌｉｌｙ。
1.2 方法
取百合鳞片经消毒后,接种于ＭＳ培养基上,诱导丛芽体,丛芽体继代扩增后,剥取丛芽叶片基部进行处理。
1.2.1 6 ＢＡ和ＮＡＡ处理 以ＭＳ为基本培养基,设计系列浓度的6 ＢＡ和ＮＡＡ处理组合,6 ＢＡ(ｍｇ/Ｌ)为:0,0 5,1 0,2 0;ＮＡＡ(ｍｇ/Ｌ)为:0,0 1,0 2,0 4。共16个处理组合,代号分别为:Ｄ11、Ｄ12至Ｄ44。每个处理组合接种3瓶,每瓶接10个叶片基部,长度约为1ｃｍ。2个月后观察统计,生根率以长根植株占成苗植株的百分数进行统计;结鳞茎率以结鳞茎植株占成苗植株的百分数进行统计。
1.2.2 培养条件 百合适宜的培养温度为22～25℃,光照强度为1000～1500ｌｘ,每日光照10～16ｈ,相对湿度约为70%。
2 结果与分析
不同浓度激素组合对叶片成苗和结鳞茎的处理效果见表1。
2 1 成苗率
成苗率是指所出的苗数占接种的叶基部总数的百分数。随着6ＢＡ浓度的加大,成苗率呈降低趋势。从4个浓度的6 ＢＡ看,不加6 ＢＡ的处理(Ｄ11、Ｄ12、Ｄ13、Ｄ14)成苗率最高,平均值为76 25%,说明6 ＢＡ对成苗有抑制作用。而适量的ＮＡＡ对成苗有一定的促进作用,在这16个处理中,以Ｄ12处理成苗率最高。
2 2 增殖系数
组培百合的基本目标之一是在短时间内大量繁殖小苗和球茎,所以提高增殖系数,可在短时间内获得更多的小苗或球茎。综合这16个处理,以Ｄ22和Ｄ43处理增殖系数最高,分别为:17和2 0;其次为Ｄ12、Ｄ24和Ｄ34,均为1 6。
2 3 结鳞茎率和鳞茎直径
结鳞茎率以不加6ＢＡ的为最高,随6 ＢＡ浓度加大,结鳞茎率下降;鳞茎直径也有类似的结果。表明6 ＢＡ对结鳞茎率和鳞茎直径有抑制作用。
2 4 株高和生根率
株高随着6ＢＡ浓度的加大而降低,从1 7ｃｍ降到0 6ｃｍ;生根率以不加6 ＢＡ的为最高,平均值为90 5%,加大6 ＢＡ浓度明显抑制百合生根。这说明ＮＡＡ对株高和生根的促进作用,随着6 ＢＡ浓度加大被抵消一部分或完全被抑制。
2 5 小苗的栽培和处理
对于苗高3～4ｃｍ的已生根带有鳞茎的小苗,可打开瓶口炼苗3～5ｄ,然后移入沙∶土(1∶1)的基质中,保持温度15～25℃,湿度70%以上,50%自然光照,可得到较高成活率。所用沙土最好是经过灭菌的,如果用未灭菌的沙土,小苗茎部容易受细菌和霉菌的侵染而腐烂,影响成活率;用高温灭菌的沙土混合物,小苗不容易得病,长势较未灭菌的健壮,且成活率较高。对处于芽苗阶段的小苗,可继代至ＭＳ+ＮＡＡ003ｍｇ/Ｌ的培养基中,促进其生长;对没有生根的小苗可继代至1/2ＭＳ+活性炭5%的生根培养基中,进行生根培养,然后再进行移栽。
3 小结与讨论
综合以上试验结果得出:6ＢＡ主要有提高增殖系数的作用,但抑制结鳞茎和减小鳞茎直径,同时抑制植株长高和生根,这与赵祥云[5]的研究结果相似。ＮＡＡ有促进成苗、植株长高和生根的作用,但过多ＮＡＡ会使气生根增多,不利于小苗生长。从成苗和结鳞茎率角度看,本试验最优组合为Ｄ12;从提高增殖系数角度看,以Ｄ43最好;如果把成苗和提高增值系数结合起来,则Ｄ22最优。所以适当地调整6 ＢＡ和ＮＡＡ的浓度比,才能得到理想的结果。本试验对影响百合成苗和增殖的2种激素进行了初步研究,从中选出了利于成苗和增殖的最优组合。王爱勤[7]等认为糖的浓度对试管结鳞茎有影响,关于糖浓度及如何调控和增加其他一些激素使百合在试管内快速结鳞茎和增大鳞茎直径等技术,有待于进一步研究
