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白菜胚体愈伤组织怎么做原生质体?

时间 : 07-14 投稿人 : 迷蝶香园艺 点击 :

白菜胚体愈伤组织怎么做原生质体?

问答 | 白菜胚体愈伤组织怎么做原生质体?

选择生长健康、无病害的白菜植株。70%乙醇、次氯酸钠等,用于表面消毒植物材料。

制备白菜的愈伤组织原生质体通常涉及一系列步骤,主要包括表面消毒、愈伤组织的培养和酶解等过程。以下是一个一般的操作流程:

材料准备:

1. 白菜胚体:

选择生长健康、无病害的白菜植株。

2. 表面消毒剂:

70%乙醇、次氯酸钠等,用于表面消毒植物材料。

3. 培养基:

含有植物生长激素的培养基,如Murashige and Skoog培养基(MS培养基)。

4. 愈伤组织培养条件:

具体培养条件根据实验设计和白菜品种而定。

5. 酶液:

植物酶解酶、纤维素酶等,用于酶解植物细胞壁,释放原生质体。

6. 实验室用具:

显微镜、吸管、移液器、培养皿、滤纸等。

步骤:

1. 表面消毒:

将白菜胚体在流动水下清洗,去除表面的尘土。

将白菜胚体浸泡在70%乙醇或次氯酸钠等表面消毒剂中,进行表面消毒。消毒时间通常在几分钟到十几分钟之间,具体取决于消毒剂的浓度和植物材料的特性。

2. 剪切和培养:

将表面消毒后的白菜胚体剪成小段。

将这些小段培养在含有植物生长激素的培养基中,提供适当的温度和光照条件。培养时间根据实验设计和研究目的而定,通常是数天到数周。

3. 收获愈伤组织:

当愈伤组织形成并达到适当的大小时,收获愈伤组织用于后续的实验。

4. 酶解和原生质体制备:

将收获的愈伤组织放入含有植物酶解酶、纤维素酶等的酶液中,进行酶解。酶解时间和温度根据实验需求而定,通常需要在无菌条件下进行操作。

过滤酶解后的混合物,获取含有原生质体的悬浮液。

5. 培养原生质体:

将原生质体悬浮液接种到含有植物生长激素的培养基中,提供适当的生长条件。

这是一个一般性的步骤概述,具体的实验条件和步骤可能因实验目的、植物品种和培养条件的不同而有所不同。在进行实验之前,请确保阅读相关的文献和方法论,以了解适用于您研究的特定条件。同时,进行实验时,严格遵循无菌技术,以防止外部微生物的污染。

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