1 培养基制备
银耳菌种培养基的配方较讲究，必须采用纯度较高的白楠树木屑，白楠木砍后任凭风吹雨打半年以上，切片，晒干，过2mm筛网粉碎。配方为白楠木屑65%，优质麦皮33%，优质石膏粉1%，白糖1%，含水量62%～65%，pH值自然。制作时将木屑、麸皮、石膏粉拌匀，倒入相应的糖水，搅拌均匀后过筛、装750mL瓶、压平高度至瓶肩、清刷、塞棉花塞。然后装入高压灭菌锅内灭菌，当锅内压力达0.05MPa时，充分排除锅内冷气体；当锅内压力达0.20MPa时开始计时，并排气至0.15MPa，保持火力，不能减弱，保持锅内压力0.20MPa2h，排气口开一点，让其有少量的气体排出。灭菌结束后，排去锅内的蒸汽并卸出灭完菌的培养基，排到冷却室让其自然冷却等待接菌。若气温高于25℃时，先预冷30min后，把原种培养基推到有制冷设备房间内进行强制冷却。
2 分离材料选择
2.1 菌袋 从商品化银耳栽培的群体中，选择生长期28～33d，朵形完好，朵大5～8cm，耳片肥厚、舒展、无病虫的种耳作为分离材料（图1）。但由于栽培袋银耳耳片分离常带有污染物，分离成功率低。
2.2 种瓶 从银耳原种中选择优良的菌株作为母种，其生长时间35～38d左右，瓶壁内香灰菌丝爬壁力强，基内香灰菌丝生长有力，转色好，培养基开始收缩，朵大4～5cm，耳片生长没碰到瓶壁，朵型圆正，生长健壮，耳片白且厚，色泽滑润。
3 组织分离方法
3.1 菌袋分离 在接种箱内按无菌操作要求，用锋利的刀片切取一片1～2cm2大小的银耳耳片，用镊子夹住耳片放入无菌水里冲洗三次，然后放到灭菌过的木屑培养基中，用记号笔作好标签。用同样的方法接种3～5瓶。
3.2 种瓶分离 在接种箱内按无菌操作要求，破开母种瓶，用锋利的刀片切取一片1～2cm2大小的银耳耳片，放在灭菌过的木屑培养基中，用记号笔作好标签。用同样的方法接种3～5瓶。
4 基内分离
4.1 菌袋分离 将银耳子实体采下，把耳基从菌袋挖出，用接种铲去除耳基底表面的棉子壳至白色坚硬的耳基，用接种针挑取黄豆粒大小的耳基到灭菌的木屑培养基表面中心点，用记号笔作好标签。用同样的方法接种20～30瓶。
4.2 种瓶分离 母种破瓶后，用接种铲把子实体铲除，挖出表面的培养基，把耳基表面的黑斑挖去，耳基周边的木屑也挖出，露出整个耳基。用接种针挑取黄豆粒大小的耳基至灭菌过的木屑培养基表面中心点，用记号笔作好标签。用同样的方法接种30～40瓶。
4.3 耳片种瓶 由于银耳耳片在生长过程中表面含有银耳的香灰菌丝，将耳片挑到新培养基上时能萌发香灰菌丝，同时耳片能弹射出银耳孢子并萌发。经过半个月的培养，两种菌丝生长正常后，在接种箱内，将表面的耳片挑出。继续培养25d左右即可生长出银耳子实体，选择子实体和菌丝生长的情况符合银耳品种特性作为母种进行扩繁，方法同上。
5 菌种培养关健技术
将接种的培养基放到21～23℃的培养室内培养，每天通风两次，每次30min。7d后进行检查看是否有污染，及时去除被污染。15d检查一次，菌丝走到离瓶底1cm时再检查一次，主要去除被污染和菌丝不整齐，转色不好的。35d左右，选择子实体生长健壮、朵型圆正、耳片白且厚、朵大3～4cm，瓶内壁菌丝生长有力，爬壁力强，可作为母种，进行基内组织分离，提纯复壮。
6 提纯复壮优化质量
将用上方法取得的菌种在接种箱内按无菌操作要求，用接种铲将基质块表面老菌丝铲除，取中下层基质块，挑取黄豆粒大小基质块，接入已灭菌过的木屑培养基内（其培养基配方同前面介绍）上面。用同样方法接30～50瓶。置于室温2l～23℃的培养室内培养，7d检查，是否有污染，及时去除被污染。15d检查一次，菌丝走到离瓶底1cm时再检查一次，主要去除被污染的和菌丝不整齐，转色不好的。经35d培养后，选其中香灰菌丝长势均匀，吃料快，白毛团胶质化快、出耳早、朵型圆正、耳片伸长好、无杂菌污染的为原种。进一步扩繁栽培种，用于生产栽培用。
7 讨论
利：银耳菌种特性保持好，银耳菌丝纯正，香灰菌丝强，出菇早，菇生长快、产量高。
弊：多次基内分离也会造成种性退化，在现有仅靠肉眼观察的条件下，不能很好发现。以致杂菌、放射菌（俗称杨梅酸菌）、细菌等的潜藏和退化仍然是不可克服，致使种质不纯，影响栽培效益。因此还有待研究，需要从原料选择、灭菌、接种和培养等环节加强管理，是提高种性稳定的重要手段。（钟长科）
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