一、食用菌种瓶的选择
用100毫升医用盐水瓶代替试管作盛装培养基的容器。
二、培养基的配制
1．配方：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂18～20克，水1000毫升。
2．制作：马铃薯挖去芽眼，去皮洗净，切成薄片后加水，在铝锅中煮沸25～30分钟，用4层纱布过滤，取滤液放入铝锅中，加入琼脂，小火加热并不断搅拌，待琼脂溶化后加入葡萄糖，加开水补足1000毫升，搅匀，趁热装入盐水瓶中，每瓶装8～10毫升，塞上棉塞 棉塞要求干燥、松紧、长度合适 ，再用牛皮纸包住棉塞及瓶口部分，用胶圈扎紧瓶口。
三、灭菌
采用高压灭菌，若没有专用高压锅，可用家用高压锅进行灭菌。方法是：将装好培养基的菌种瓶放置在高压锅中，瓶间留有空隙，不可堆放过紧，以利蒸汽循环，灭菌彻底。当压力表指针指到0．05时，打开放气阀，集中排出冷空气，使压力降到零时，关闭排气阀进行升压灭菌，自动放气后保持30分钟 家用普通高压锅灭菌1．5小时 ，让其自然冷却，取出放置在接种箱中备用。
四、菌种分离
主要采用组织分离法。通常是从食用菌子实体内部分离纯菌种，操作时，从子实体内切取一小块组织，放在培养基中培养可长出纯菌种，且菌丝萌发快，遗传性状稳定，后代不易发生变异。
1．种菇消毒：种菇采下后，切去菌柄，放入洗净的盘内，在装有紫外灯的接种箱内照射20～30分钟。
2．接种块切取：在已消毒的接种箱内，撕开子实体，用经酒精灯火焰杀菌冷却的小刀，在菌柄与菌盖交接处内部切取黄豆大小组织块，放入菌种瓶内培养基上培养。
3．接种块选择部位：接种块选择部位因食用菌种类不同而异，菇体肥厚的种菇，在菌盖外缘菌盖皮和菌褶交接处切取组织块进行分离。
菌体小、盖薄、柄空的菌类 如金针菇 ，应快速击掉菌盖，用接种针钩取菌柄顶端生长点组织进行分离。
菌肉极薄菌柄中空孢子不易萌发的伞菌类，可采用子实层分离法，选取半破膜的子实体，移入培养基上，菌丝萌发后即转入新的培养基上。对子实体较大、质地结实的多孔菌类，应取子实体外缘菌肉组织块。
含水量低的子实体切取5平方厘米的小块，在酒精灯火焰上烘烤5～10秒钟，使子实体表现微焦，然后用无菌刀切取菌肉组织一小块，移入培养基上。
五、培养及管理
将放入组织块的菌种瓶竖放在室内架上或平台上，室内温度控制在20～28℃，经过1～2天组织块萌发。菌丝生长期间注意观察。发现污染及时挑出，经过10天左右菌丝长满瓶，母种制作成功。
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