母种多用半合成培养基培养。母种的生产应有一个计划，即预计某一时期内所用生产种的数量，从而确定母种生产的数量。母种第一代尽量多转出斜面管，减少转管的代次，避免造成菌丝生活力下降、出菇率低等现象。斜面管在摄氏4度冰箱可保存3个月，但最好在一个月内使用。加石蜡油的斜面在摄氏4度时保藏时间可长些。母种扩大生产前要经严格检查是否污染病虫害、标签是否齐全，是否经过出菇试验等全面考核才能进行扩大生产。第一次母种转管，每管可转出60—80管第二次母种。第二次母种一部分用于转接原种使用，一部分保藏。同样做法，一般母种经3—4次代转传为好。
斜面母种转管方法：转管过程应在无菌箱或无菌室进行。工作人员、工作环境、一切器材要经严格消毒或灭菌。接种前斜面试管用75%酒精抹擦，酒精灯旁用拿接种铲的手的指间拔下棉塞向外夹着，火焰轻轻烧过管口才转管，已灭菌后稍凉的接种铲先在母种斜面上纵向切成2毫米宽的长条，再用接种铲沿斜面的水平方向深约2—3毫米铲离，然后用接种锄将斜面横向切成宽2毫米、长4毫米的小块。用接种铲把斜面前段约1厘米的部分除去，其余菌种逐一小块接入空白斜面培养基内，菌种块放在空白斜面的中部为好。把管口烧过，塞上棉塞。以上操作在无杂菌条件下进行，称为无菌操作。离开酒精灯，写上标签。新接上的菌种立即进行适温培养。当原菌丝块的菌丝萌发新菌丝时，可将原来温度调低摄氏2—3度，让菌丝缓慢生长，会更强壮，更有生命力。至菌丝长满斜面即为菌种成熟。
