菌种分母种、原种和栽培种。通常也称一级种、二级种、三级种,其培育方法各异,现将其技术要点阐述如下:
1、母种培养:是指用组织分离或孢子分离得到的菌种。母种培养基的制备通常用土豆洋菜培养基。配制1000毫升培养基,用土豆200克,琼脂18-20克,葡萄糖20克。
做法:先将土豆洗净去皮,切成蚕豆粒小块,放1000毫升水中煮沸30分钟,用6-8层纱布过滤,补足损失水分。将琼脂加入溶化后,加进溶解的糖,补充水分至1000毫升。以后分装试管,每管装量1/5-1/4,并加棉塞、包纸。在1.2公斤压力下灭菌30分钟,趁热摆成斜面。冷却后置于25℃-27℃条件下观察无杂菌即可接种。一支母种可转管25-30支。
在无菌操作下接种的试管置于25℃左右恒温条件下培养,半个月左右菌丝可长满试管。培养过程中应注意除掉杂菌污染的试管。培养好的母种移入冰箱,在4℃条件下保存半年,或室温下保存三个月。
2、原种培养:原料可用木屑或棉籽皮。木屑培养基配方:木屑78%,麦麸或米糠20%,糖1%,石膏1%。棉籽皮培养基配方:用50公斤棉籽皮加土豆浸出汁水3%,(1.5公斤土豆切成泥煮沸30分钟的滤液),糖0.1%,硫酸镁0.1%。
做法:培养料加水拌均匀,湿度以用手紧握料,指缝内见水珠而滴不下来为宜,一般料水比1:1.2-1.3。然后装瓶,装瓶方法是边装边将瓶轻轻地抖动,使瓶上下部紧密适中,装至瓶肩部将料压平,洗净瓶口内外的培养料,加棉塞包纸捆好放进高压消毒锅内进行灭菌,在1.5公斤压力下灭菌一小时。冷却后,在无菌操作条件下接种。将试管中母种接入瓶中,一支母种可接4-5瓶原种,接种后置于25℃恒温条件下培养一个月左右菌丝可长满瓶,即为原种。
3、栽培种培养:栽培种的制备实际上就是原种进行一次扩大培植。栽培种木屑培养基的配方同原种培养的配方。棉籽皮培养基的配方也同原种培养的配方。装瓶后灭菌,在无菌条件下,把原种菌种接入栽培种瓶内。一瓶750毫升原种可接80-100瓶栽培种。接种后置于25℃恒温条件下培育一个月左右,长满瓶后即可播种。在培养原种和栽培种时,接种后每隔2-3天要检查一次, 直至菌丝长满料面后每周检查一次。拣出有杂菌污染的菌种,并远离培养室处理掉。
