1.母种培养基制作
用马铃薯琼脂做培养基，培养基的配制方法为：先准备200克的马铃薯，要选择新鲜、无芽、无病虫害的，将马铃薯去皮后切成小片，并放入1000毫升的水中煮沸，这样维持15分钟。这时再将马铃薯捞出，用纱布过滤掉马铃薯残渣，再往滤液中分别加入20克葡萄糖，20克琼脂。如果没有葡萄糖，也可以使用白糖。放好后再次将滤液煮沸，待琼脂完全溶解后，我们就可以用玻璃漏斗把滤液分装入，规格为18×180毫米的玻璃试管中。
通常滤液的高度不能超过试管的三分之一，再及时地用棉花塞上试管，做到不透气，防止其它杂菌的侵蚀。接着把玻璃试管放入高压消毒锅中灭菌，温度保持在121℃，灭菌30分钟。待消毒锅压力降至零后，把试管取出，要在等滤液未冷却之前将其略微倾斜摆放，一般倾斜度在20度，再过半小时，由于琼脂的凝固作用，试管中的培养基就凝固的时候母种培养基就做好了。
2.母种接种
接种要在无菌操作室或无菌室中的超净工作台上进行。具体操作方法我们来详细看一下：在接种之前，无菌操作室或超净工作台都预先打开紫外灯照射10-30分钟。这样起到消毒杀菌的作用，工作人员也要在紫外线灯下照射杀菌。这时在操作台上点燃酒精灯，右手持接种针在火焰上灼烧，一直到接种针针尖变红为止，让其在空气中冷却一会儿。左手持两支试管一支为原始母种，另一支为待接种的试管，用右手拔下试管的棉花塞，再用接种针从母种中挑取0.5平方厘米的一小块菌种块，轻轻放在试管斜面上。最后塞上棉花塞，母种接种工作就算完成了，但在操作中要注意一点，不要让菌种块碰到未消毒的试管外壁。
3.母种培养
我们将接好种的试管放置在恒温培养箱中进行母种的培养，温度控制在25℃左右。一般培养一个星期以上就可以发菌丝，进行原种的接种了。
