(1)母种的培养
培养基的配制：多采用马铃薯一琼脂培养基，其配方是马铃薯250克，蔗糖50克，琼脂20克，尿素3克，水1000毫升；按常规方法配制，调节PH值到6－7，分装试管内，包扎，灭菌，使其成斜面培养基。纯菌种的分离与接种：选择新鲜、皮薄、肉白、质紧、有香味的成熟茯苓菌核作菌种，先用清水洗净，然后移入接种箱内；月75%的酒精冲洗，再用蒸馏水或冷开水冲洗数次，用滤纸吸干，用小刀切开，挑起中央白色茯苓肉一小块，放到培养基斜面上，然后放入25－30度的恒温箱或培养箱中培养5－7天，待白色菌丝长满斜面时，即为纯种。
(2)原种的培养
母纯种培养成功后，不能直接用于生产，还要扩大繁殖培养原种。原种的培养基配方：小松木块55%，松木屑20%，米糠或麦麸20%，蔗糖4%，石膏粉1%；加适量水，调节PH值为5－6。配制方法：先将木屑、米糠、石膏粉拌匀；另将蔗糖加水溶化，放人松木块煮沸30分钟，待松木块充分吸收糖液后，捞出；再将本屑、米糖、石膏粉等倒入液中，拌匀；然后加入木块，拌匀，以握之手指缝不出水为度。然后分装于500毫升广口瓶中，灭菌，冷却后即可接种。接种方法：在无菌的条件下，从母种中挑选出黄豆粒大小的母菌种放入广口瓶原种中央，即为原种。
(3)栽培种的培养
栽培种培养基的配方为木块66%，松木屑10%，麦麸或细糠21%，葡萄糖2%，石膏粉1%，尿素0.4%，过磷酸钙1%，加水适量，调PH值5－6。配制方法同上。将原种中的菌丝接到装有栽培料的广口瓶中，约30天左右菌丝长满全瓶。1瓶斜面纯种可按5－8瓶原种，1瓶原种可按60瓶栽培种，1瓶栽培种可接2－3窖茯苓。
选窖与备松木料
选择土层深厚疏松、排水良好的砂质壤土，向阳坡地及未种过任何作物的生荒地、林地，冬季将窖挖好，窖长80厘米，宽45厘米，深30厘米，窖与窖的间距为30厘米，开好排水沟。
以松木为栽培料，在农历12月份砍下松树，去树杈，削去形成层的外皮，露出木质部，削皮留筋，锯成60―80厘米长的木段，堆码后干燥，约40天后，无松脂分泌，木心干燥后即可接种。
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