茵种保藏
要保持灵芝菌种的新鲜、优质,必须妥善保藏菌种,使灵芝菌株新陈代谢速率减缓,避免菌种衰老死亡,可置菌种在清洁干燥、冷冻、低温、缺氧的环境中保存。现具体介绍以下几种方法:
(一)试管斜面低温(冰箱)保藏法 在母种试管外面包一层塑料薄膜或牛皮纸,以防水分蒸发,而后置于冰箱内4℃条件下保存,菌丝在此温度下几乎停止生长而处于“休眠”状态,代谢作用缓慢从而延长保存时间。
保存过程中要注意几点:
1.温度不能太低,否则斜面培养基易脱水结白而冻死菌种。
2.低温保存的菌种,每隔三四个月须转管一次。
3.保存期间要经常检查棉塞是否受潮,否则要及时更换棉塞(无菌棉塞),以免感染杂菌。
4.对于低温保存较长的菌种,使用前必须先把菌种放在适宜温度下让其“苏醒”,恢复菌丝的生命活力。
该方法简单易行,设备仪器简便,应用范围广,无论科研单位还是栽培生产单位,都可采取低温保存菌种,但由于经常要转接试管,代数过多会退化菌种,且费工费时。
(二)石蜡保藏法 将要保存的灵芝菌种移接到cpda培养基斜面上,在25度左右的恒温中培养7天左右,然后用液体石蜡封藏保存。石蜡要选化学性纯的,首先在121度下高压灭菌30-60分钟,连续灭菌2次,再用无菌吸管灌注到斜面上,液体石蜡以高出斜面尖端1厘米为宜,然后置于室内干燥处或冰箱中保存,用石蜡封闭,隔绝了菌丝与空气接触,防止水分蒸发,菌株新陈代谢减缓,菌种保存时间延长,一般可保存5年以上,但以l.2年移植一次为好。
需用菌种时,从试管中抽取菌丝移植到pda培养基斜面上进行活化培养,即可作菌种用。
保存过程中要注意几点:
1.为防止封闭石蜡后灵芝菌丝再生长,应适当延长菌丝的培养时间。
2.倒入的石蜡不能低于斜面尖端,否则液体石蜡挥发快,斜面培养基易干涸。
3.石蜡灭菌要彻底,否则菌种易感染杂菌。
4.定期检查棉塞是否污染,培养基是否露出石蜡液面,如露出液面,要及时灌注无菌石蜡。
5.菌种必须垂直放置,否则棉塞易受污染。
(三) 白胶塞封口 保存法选择与试管口径相符合的白胶塞,用0.2%煤酚皂溶液洗涤,浸泡在95%乙醇内保存。当试管斜面长满菌丝后,无菌操作,拔去棉塞,取浸泡的白胶塞一个,通过火焰快速塞入试管口,并用石蜡封存。
此法与石蜡保存效果相同,一般可保存菌种几年,但以每年移植一次为好。
(四) 麦鼓保存菌种法 选取新鲜的麦鼓用适量的清水调湿,然后装入试管,占试管总长的五分之二,洗净管壁上的麦麸,塞好棉塞,常规方法灭菌后接种培养,5至7天后,当菌丝长满培养基表面,放入真空干燥器中将培养基内水分抽干,然后移入盛有氯化钙的干燥器内,用凡士林密封,常温下保存。此法保存灵芝菌种存活力在1年以上。制作过程中注意灭菌彻底,无菌操作。
(五) 木屑保存菌种法 选用阔叶杂木屑78%、麦麸20%、白糖、石膏各1%,加适当的水调湿,分装试管,占试管的三分之四长,在1.2至1.5公斤每平方厘米高压下灭菌40分钟左右,冷却后无菌接入灵芝菌种,适宜条件下培养10~15天,菌丝接近长满木屑时,用石蜡熔封管口,或换上无菌白胶塞,置常温或冰箱中保存。
该法只要木屑不干涸,可保持菌种活力3年以上,保存时应注意:
1.木屑只能用阔叶杂木屑,松、杉、樟树等有芳香气味的不能用。
2.水分含量适宜,灭菌彻底。
(六) 木块保存菌种法 将阔叶树木切成1立方厘米或1厘米×1厘米×2厘米的小木块,把木块置于1%葡萄糖水中浸泡,湿透,或用0.2%磷酸二氢钾、0.3%的尿素配制液中浸泡2小时,然后按20%木屑、80%木块比例混合,含水量60%-70%左右,拌匀后装入试管,试管最下部与上部均有1~2厘米厚的木屑,中间为木块,装好试管后高压灭菌40分钟,冷却后接种培养7天,然后取出,密封管口,置冰箱中保存。
(七) 地下保存法 在室内阴凉处挖个坑,埋一只小坛子,坛口低于地面,四周填实,上面用水泥抹平并浇制一只盖子,使用时用塑料袋装些生石灰,放人坛底,把要保存的菌种用薄膜包扎好后放人坛内,盖好坛盖即可。一般每2-3个月转管一次。