任何一个香菇品种，经过组培或孢子培养制成原始母种（保藏种）由原始母种转扩，即为生产母种。
生产母种通常用PDA培养基，选用180×18毫米试管，制成斜面试管接种而成。PDA培养基配方：土豆（去皮、去芽） 200克（也可用淀粉，用量为6克/1000毫升）、葡萄糖 20克、琼脂 20克、磷酸二茎钾 2克、复合维生素B 2克、旦白栋 5克、硫酸镁 0.3克、水 1300毫升。
上述配方可配制1000毫升溶液培养基。配制方法：土豆去皮、去芽，称重，切成0.5厘米厚片，放入24公分铝锅中，加入1300毫升水，煮沸5~8分钟，用双层纱布过滤，取其滤液重新倒入锅中加入琼脂，煮沸后转小火，使琼脂溶化，将维生素B在研体内加入少量水研磨成稀浆，再倒入锅中，同时，加入葡萄糖、磷酸二茎钾、旦白栋和硫酸镁，搅匀后趁热分装试管，装入试管内的溶液高度以试管的1/4为宜，塞上棉塞，置于高压灭菌锅中1.5个大气压，灭菌30分钟，或用蒸锅蒸75分钟，灭菌后趁热摆斜面，培养基斜面长度以占试管的3/4弱为宜。如棉塞潮湿，要进行烘烤3~5小时，否则，潮湿棉塞易染杂菌。斜面培养基试管置干燥处3天后，若斜面无杂菌形成，表明灭菌彻底，即可用于接种。
接种：通常在接种箱内进行。先将斜面试管放入接种箱内，再用75%酒精擦接种及待接菌种试管，放入接种箱，同时放入酒精灯、接种针，用2~5克烟雾剂点燃烟熏30分钟后，即可接种。接种前，先点燃酒精灯，用75%酒精擦手，用酒精灯火烧接种针，冷却后，放入待接菌种试管内，左手拖握菌种试管和斜面试管、右手用姆指、食指和中指象拿笔一样握接种针，在菌种试管内挑取米粒大小菌块放入斜面试管中，塞上棉塞即可，一支菌种试管可接50~60以斜面试管。接完种后，每5支斜面试管捆包在一起，放入培养室内，在23~25℃条件下，12~15天长满试管斜面，该即为生产母种。
