母种即一级种。因处于保存期的大球盖菇母种，菌丝生长缓慢或停止生长，需进行复壮。具体做法是：将大球盖菇母种的菌丝接种到加富培养基上，促进菌丝快速生长，获得菌丝粗壮、浓白、生长势旺的复壮菌种，为制作原种打好基础。
培养基配方：土豆200g、葡萄糖20g、琼脂20g、硫酸镁1.5g、磷酸二氢钾2g、蛋白胨2g、水1000ml。
培养基制作：将土豆切成丁或条状，加水煮烂，一般需煮沸20～30分钟并不断用玻璃棒搅拌后用四层纱布过滤，除去滤渣，在滤液中加入葡萄糖、琼脂、硫酸镁、磷酸二氢钾、蛋白胨，继续加热搅拌溶解，冷却后加水补至1000ml，分装锥形瓶中，加塞，并用纱布包扎封口，121℃灭菌20分钟左右后取出，冷却后贮存备用。
接种培养：加热培养基使其溶化后，在超净工作台内，分装至试管，斜置，待冷却后，每个试管斜面接种2个或2个以上菌种块，加塞，放入28℃恒温培养箱内，培养7～9天，菌丝即可长满试管。
原种即二级种，用于接种制作栽培种。大球盖菇的菌丝生长较为缓慢，常规的原种制作方法，大球盖菇菌丝在培养料中生长到一定程度，生长速度会逐渐减慢，甚至停止生长，3～4个月也不能长满菌瓶，致使培养的时间过长，菌丝老化，丧失了活力，影响了原种的质量。针对这个问题，通常采用摇瓶的方法来刺激菌丝的生长，提高菌丝的密度。采用此方法，一般原种制作整个过程只需20天左右即可。
制种容器及培养料配方：容器选择口径为3cm的750ml耐高温玻璃瓶，培养料以麦粒为主料94%、木屑5%、石膏或者碳酸钙1%、培养料含水量控制在65%左右。
拌料：将浸泡或煮好的小麦粒，滤去水分，加入辅料，混合均匀，含水量控制在65%，以备装料。
装料：装料量及料的松紧度，是决定摇瓶质量的关键。装料以灭菌后达到菌瓶总容积的1/2为好，最多不超过3/5。
灭菌：在0.1～0.12MPa压力下，灭菌1.5～2小时。灭菌结束后，趁热抖动培养料，使培养料分散，否则冷却后结块。灭菌时间不宜过长，否则小麦成糊状或者结块，导致透气性和养分下降，不利于菌丝生长。
接种培养：采用多点式接种，每个菌瓶接入2块以上菌种块，塞上棉塞，然后抖动培养料，使菌种块分布均匀，然后放至25～28℃黑暗条件下培养。
摇瓶：接种后5天左右，菌丝萌发至2cm菌圈时，即可进行摇瓶处理。要求振摇剧烈，使料块摇散，菌丝摇断，并使长有菌丝的麦粒充分混匀在整个培养料中，这样每个带菌丝麦粒就是一个生长点。再过5天左右，菌丝萌发至2cm菌圈时，再次抖动培养料，一般抖动3～5次即可。此处理可起增氧作用及刺激菌丝生长，菌丝继续培养8～10天，菌丝满瓶即可用来制作栽培种。
栽培种制作
用于栽培种制作的配方、培养料、容器与原种制作相同。为刺激菌丝的生长，也需对菌瓶进行抖动处理。选取长满瓶、生长茂盛、无污染的菌种，在无菌环境下，用接种工具将原种搅拌使其散开，再用接种铲将原种接种至装有培养料的菌瓶中，抖动菌瓶，使原种均匀分布到培养料中，这样每个原种菌块都成为一个萌发点，一瓶原种至多可接种30个菌瓶，这样一定程度上可抑制杂菌的生长，提高栽培种的质量。接种完以后放入25～28℃黑暗条件下培养，5天以后，待菌丝萌发长至2cm菌圈，抖动3～5次，刺激菌丝生长，一般15天左右即可长满菌瓶。
