随着国内外市场对虫草产品需求的增加，虫草生产方式由小户型、季节性生产的模式逐渐向工厂化、标准化、周年化、规模化生产发展。伴随新技术、新工艺、新设备的研发问世，采用深层培养工艺制备虫草液体菌种已应用于生产中。由于液体菌种具有成本低、生产周期短、菌龄一致、接种简便快捷、便于管理等优点，因而深受虫草栽培者的欢迎。
一、虫草液体菌种的生产方式
一般可分为电磁搅拌法、摇瓶机法、简易深层发酵（吹氧）法、发酵罐法。
1、电磁搅拌法。设备技术比较简单，投资较少，但生产量小，生产的液体菌种是菌丝团。
2、摇瓶机法。摇瓶机培养投资少，设备技术简单，管理方便，适合一般菌种厂生产使用，生产出来的液体菌种是菌球。
3、简易深层发酵（吹氧）法 。 制作工序繁琐、配套设备要求较高、各部件必须在无菌条件下进行组装，生产的液体菌种是菌球。
4、发酵罐法 。 需要一整套的发酵设备，投资大，技术要求严格，只适用于工厂化的大规模生产，生产出来的液体菌种是菌球。
二、虫草液体菌种的培养方法
通常采用摇瓶机法和简易深层发酵（吹氧）法来生产培养液体菌种。若小规模生产，一般可采用摇瓶机法培养液体菌种。本文主要介绍摇瓶机振荡培养技术。
1、 液体培养基配方
（1）土豆20%（煮汁）、葡萄糖2%、酵母膏0.5%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁 0.05%、维生素B1 2片、水1000ml、pH值自然。
（2）土豆30%（煮汁）、蚕蛹粉2%、蔗糖１%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、维生素B1 2片、水1000ml、pH值自然。
（3）土豆20%、葡萄糖2%、玉米粉2%、黄豆粉1%、酵母膏0.2%、磷酸二氢钾0.15%、硫酸镁0.05%、水1000ml、pH值自然。
（4）葡萄糖1%、蛋白胨1%、酵母膏0.l%、磷酸二氢钾 0.1%、硫酸镁 0.05%、生长素5ml、水1000ml、pH值自然。
（5）葡萄糖2%、蛋白胨0.2 %、磷酸二氢钾0.046 %、硫酸镁0.05 %、磷酸氢二钾0.1 %、水1000ml、pH值自然。
（6）葡萄糖2%、蛋白胨0.4%、牛肉膏0.4%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05 %、维生素B1 2片、水1000ml、pH值自然。
（7）葡萄糖3%?、豆 粉2%、玉米粉1%、硫酸镁？0.05%、磷酸二氢钾0.1%、酵母粉0.5%、水1000ml、pH值自然。
（8）葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母粉0.5%、玉米粉2%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、水1000ml、pH值自然。
（9）葡萄糖2%、黄豆粉1%、磷酸二氢钾0.3%、硫酸镁0.04%、氯化钠（食盐）0.03%、味精0.01%、维生素微量、水1000ml、 pH值自然。
（10）蔗糖3%、天门冬酰胺0.1 %、磷酸二氢钾0.125 %、硫酸镁0.03 %、氯化钠（食盐）0.05 %、水1000ml、pH值自然。
2、液体培养基的制作
（1）按配比精确称取各种营养物质。
（2）配制溶液。为避免发生沉淀，可将各种营养成分单独溶解分别制成母液，加入的顺序一般是先加缓冲化合物，溶解后加入主要元素，然后是微量元素，再加入维生素等。最好是每种成分完全溶解后，再加入第二种营养成分。若各种成分均不发生沉淀，也可以一起加入。
若用马铃薯、玉米粉、黄豆粉等原料时，应先制取这些原料煮汁，然后再把煮汁与其它成分混合。
例如：配方一液体培养基的配制。 土豆20%（煮汁）、葡萄糖2%、酵母膏0.5%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁 0.05%、维生素B1 2片、水1000ml、pH值自然。
（3）将新鲜土豆洗净去皮、挖掉芽眼的土豆切成小块放入小锅或大烧杯中，加入一定量的水，用文火煮沸30分钟左右，至土豆软而不烂时，用6～8层布过滤，取滤汁于锅中。
（4）补水。 加水至1000～1200 ml。
（5）按配方顺序加入需加的其他营养物质，文火煮5～10分钟。
（6）充分搅拌均匀，并调PH。
一般用10％HCl或10％NaOH调pH，用pH试纸（或pH检测仪）进行测试。
（7）沉淀分装。 培养液配制好后，沉淀1小时取上清液，分装入500mL容量的三角烧瓶中，每瓶装量为100mL;750mL的瓶装量为200mL;1000mL的瓶装量为300mL，在配制培养液时，可加入0.02%的植物油或0.06%的泡敌（聚环氧丙烷甘油醚）作为消泡剂消泡，防止在培养过程中培养液产生气泡。为了击碎菌丝每瓶内加入5～10粒小玻璃珠。
（8）塞棉塞 。棉塞松紧适度，不宜过紧。加棉塞后再包扎牛皮纸封口，这样既可过滤空气，避免杂菌侵入，又可减缓培养基水分的蒸发。
（9）用记号笔注明培养液的名称和日期。
（10）灭菌
① 首先将内层灭菌筒取出，再向外层锅加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。
② 放回灭菌桶，将包扎好的三角瓶直立放入灭菌桶内，盖上牛皮纸，三角瓶不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。
③加盖，将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓。
④ 通电加热，并同时打开排气阀，使水沸腾排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升，在1.0～1.1kg/cm2压力下，灭菌30分钟。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。
⑤ 灭菌所需时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，缓慢打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养液由于内外压力不平衡而冲出三角瓶，造成棉塞沾染培养液而发生污染。
三、摇瓶机振荡培养技术
灭菌结束后，取出培养液冷却到30℃以下时，在无菌条件下接入一块约2厘米的斜面菌种，菌丝面向上悬浮于培养液液面。在20℃～22℃条件下避光静置培养48小时，再置往复式摇瓶机上振荡培养，振荡频率为80～120次/分，振幅6厘米～10厘米。如果用旋转式摇瓶机，振荡频率为200～220转／分。摇瓶机室温控制在22℃～25℃，冬季室内温度低，可将摇瓶机放入恒温箱内培养。培养时间一般是在5～7天左右。
四、虫草液体菌种的检验方法
虫草液体菌种进行质量检验可采用感官检查、显微镜检查、空白培养基检查和取样测验等方法。
采用电磁搅拌法培养或摇瓶机法培养液体菌种，终止培养后，常用目测法检验，将三角瓶摇晃静止后，如菌丝球均匀地分布于三角瓶中，培养液清澈、无异味，液体中悬浮着大量均匀的小菌丝球，并伴有蛹虫草特有的香味，表示符合质量要求。
简易深层发酵（吹氧）法或发酵罐法大量生产液体菌种，为了更好地控制培养条件，达到优质高产的目的，就需要对培养液中的污染情况、菌丝活力、菌丝体含量、菌丝球数量、PH值、总糖及还原糖、氨基酸、溶氧系数等的变化进行检测。现将有关的检测方法介绍如下。
（一） 感官检查。可采用“看、旋、嗅”的步骤进行检查。
看：将样品静置桌上观察。一看菌液颜色和透明度，正常发酵醪液（培养液）一般呈白色或黄褐色，清澈透明，菌丝颜色因菌种的不同或菌种见光程度而异，老化后颜色变深；染杂菌的醪液则混浊不透明。醪液变混，有两种可能性，一是细菌污染应予以淘汰；二是由于菌丝生长粘稠过大所致。若难以判断，可进行镜检。二看菌丝形态和大小，正常的菌丝大小一致，呈球状、片状、絮状，菌丝粗壮，线条分明；而染杂菌后，菌丝纤细，轮廓不清。三看上清液与沉淀的比例，菌丝体占比例越大越好，较好的液体菌种，在瓶中所占比例可达80%左右。四看pH值指标是否变色，在培养液中加入甲基红或复合指标剂，经3～5天颜色改变，说明培养液pH值到达5.0左右，为发酵点；如果在24小时内即变色，说明因杂菌快速生长而使培养液酸度剧变。五看有无酵母线，如果在培养液与空气交界处的瓶壁上有灰色条状附着物，说明为酵母菌污染所致，此称为酵母线。
旋：手提样品瓶轻轻旋转一下，观其菌丝体的特点。醪液的粘稠度高，说明菌种性能好；稀薄者表明菌球少，不宜使用。菌丝的悬浮力好，放置5分钟不沉淀，表明菌种生长力强；反之，如果菌丝极易沉淀，说明菌丝已老化或死亡。再次观其菌丝状态，大小不一，毛刺明显，表明是供氧不足；如果菌球缩小且光滑，或菌丝纤细并有自溶现象，说明污染了杂菌。
