1、酒精灯火焰要高： 酒精灯火焰不够高时，火焰周围的无菌范围小，不利于无菌操作，也易造成接种钩灼烧灭菌不彻底，影响接种后的成品率。影响酒精灯火焰大小的因素，一是酒精浓度，二是灯芯。酒精浓度越高燃烧越好，最好使用95%的工业酒精。灯芯材料太实，塞得有紧时，内吸的酒精少，火力也不旺。所以，灯芯最好用棉花捻制，并拔出一定的长度。
2、母种试管表面和管口要灭菌彻底： 作为接种物的母种试管表面并未处于无菌环境下保存。因此，接种时要注意试管表面和管口的灭菌。具体方法：拔下棉塞后，在酒精灯火焰上转动2-3圈，这样可有效地减少菌种造成的污染。
3、拔塞、取种、接种及棉塞必须在火焰上方或附近：操作母种试管和待接种的试管一旦打开棉塞，就不能离开火焰，应为只有在火焰周围很小范围内才能是绝对无菌的。
4、接种钩：接种钩要灼烧彻底，接种钩最好用较薄的材料制成，灼烧时烧至红色。并注意接种钩灼烧的长度，灼烧长度以试管长度为度，在火焰上方反复灼烧3-4次即可。
5、接种时掉到地上的棉塞不能使用：接种时棉塞要夹于右手指间，不可放在操作台上。一旦掉到台面上，塞之前要在火焰上过一遍再用。掉到地上的棉塞严禁使用。
6、接种钩火焰灭菌后要冷却：不经过冷却的接种狗狗会烫死菌种。冷却一般在无菌的待接种的试管上部空间进行，也可在斜面上端冷却。
7、消毒酒精要清洁：注意定期更换。
8、操作要到位：动作轻盈、敏捷、快速、准确，尽可能地减小声音。
9、接种操作后的工作：及时清理，打开门窗，排除接种时酒精燃烧放出的废气。之后关好门窗，打开紫外线灯进行使用后的消毒，以便以后使用。
