1、选择优质马铃薯，去皮或挖去发芽眼，削去发青皮，切成薄片，称取200克，置于钢精锅，加水1 000毫升，煮沸后小火保持30分钟，趁热用8层纱布过滤后放人有1000毫升刻度的量杯(或量筒)中，补充水到1 000毫升，倒回钢精锅，加琼脂继续加热，待琼脂溶化后，再加葡萄糖，再补水至1000毫升，用玻璃棒搅均匀，趁热分装试管，或装入三角瓶备用。
2、分装试管，将配制好的PDA培养基，趁热(60℃)倒人事先准备好的量杯或玻璃漏斗，分装试管。每支试管装培养基为管长的1／4，培养液不可贴附管口内壁，如有沾附物必须揩拭干净。
3、做棉塞，取适量棉花做成较紧实的棉塞，塞入试管约2厘米左右，外留1厘米，紧贴试管内壁，松紧度以用手指提起棉塞而不脱掉为宜，光圆不起皱(如图3―1)，尔后将试管放入铁丝筐内。
4、灭菌，将装有培养基的试管放人灭菌锅的铁丝筐内，上面盖上牛皮纸或聚丙烯塑料薄膜，包扎好，以防棉塞受潮。加热灭菌时，排尽锅内的冷气，当温度升到121℃时，维持30分钟后停止加热。待指针回到零点，先打开锅盖的1／10开度，等到无直冲蒸气时，再打开全部锅盖，取出试管。
5、在斜面上摆放试管，将取出的试管冷却到50～60℃后，放到用木架或木条摆成一定角度的斜面上，小试管斜面长2厘米，大试管(18×200)斜面长6厘米左右。待完全凝固后，收取备用。
6、灭菌效果检查，随机取3管斜面，放在28℃下进行空白培养5～7天后，检查斜面上有无细菌和霉菌菌落。如果发现有杂菌，说明灭菌不彻底，要重新灭菌。
