1.母种制作：茶树菇母种，常从栽培的子实体或野生子实体中，选择生长良好、朵形圆整的用作组织分离材料。组织分离获得的菌株再经适应性试验，筛选出综合经济性状优良的菌株，用以示范推广。
母种培养基配方及制作：
配方1：马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂20克、水1000毫升，自然pH。
配方2：马铃薯200克、葡萄糖5克、蔗糖5克、琼脂20克，麸皮50克（煮汁）、硫酸镁0.15克、水1000毫升、自然pH。
按常规配制、分装、灭菌、制斜面备用。
分离培养。在无菌条件下，将菌柄剪短、纵切掰开，在菌柄与菌盖连接处，切取组织一小块移接到斜面培养基上。置于25±2℃恒温箱中培养，菌丝长满斜面即为母种。
2.原种、栽培种制作培养：
培养基及制作：原种常用麦粒培养基或木屑培养基，用蘑菇瓶分装。栽培种因用种量大，常用木屑为主要原料作培养基，用聚丙烯袋分装，木屑培养基与栽培料配方相同。将原料加水拌匀（麦粒需浸、煮），然后分装入瓶、袋中，压实。中间打一孔穴，扫净瓶袋粘着物，制好棉塞，按常规灭菌、冷却。
接种培养：在无菌条件下接入母种（或原种），每支母种可接原种5瓶左右，栽培种40—45天培养，菌丝可长满瓶（袋）。
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