1.母种培养基制作
用马铃薯琼脂做培养基,培养基的配制方法为:先准备200克的马铃薯,要选择新鲜、无芽、无病虫害的,将马铃薯去皮后切成小片,并放入1000毫升的水中煮沸,这样维持15分钟。这时再将马铃薯捞出,用纱布过滤掉马铃薯残渣,再往滤液中分别加入20克葡萄糖,20克琼脂。如果没有葡萄糖,也可以使用白糖。放好后再次将滤液煮沸,待琼脂完全溶解后,我们就可以用玻璃漏斗把滤液分装入,规格为18×180毫米的玻璃试管中。
通常滤液的高度不能超过试管的三分之一,再及时地用棉花塞上试管,做到不透气,防止其它杂菌的侵蚀。接着把玻璃试管放入高压消毒锅中灭菌,温度保持在121℃,灭菌30分钟。待消毒锅压力降至零后,把试管取出,要在等滤液未冷却之前将其略微倾斜摆放,一般倾斜度在20度,再过半小时,由于琼脂的凝固作用,试管中的培养基就凝固的时候母种培养基就做好了。
2.母种接种
接种要在无菌操作室或无菌室中的超净工作台上进行。具体操作方法我们来详细看一下:在接种之前,无菌操作室或超净工作台都预先打开紫外灯照射10-30分钟。这样起到消毒杀菌的作用,工作人员也要在紫外线灯下照射杀菌。这时在操作台上点燃酒精灯,右手持接种针在火焰上灼烧,一直到接种针针尖变红为止,让其在空气中冷却一会儿。左手持两支试管一支为原始母种,另一支为待接种的试管,用右手拔下试管的棉花塞,再用接种针从母种中挑取0.5平方厘米的一小块菌种块,轻轻放在试管斜面上。最后塞上棉花塞,母种接种工作就算完成了,但在操作中要注意一点,不要让菌种块碰到未消毒的试管外壁。
3.母种培养
我们将接好种的试管放置在恒温培养箱中进行母种的培养,温度控制在25℃左右。一般培养一个星期以上就可以发菌丝,进行原种的接种了。