一、培养基配方
配方：玉米粉1%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母粉0.5%、磷酸二氢钾0.1%、水95.35%、硫酸镁0.05%、维生素B1 10mg、PH值调至6.5左右。
二、制作培养方法
1. 制作一级摇瓶种：将这些原料溶于水后装在500毫升三角瓶中，每个三角瓶装量200毫升，放入玻璃珠3粒左右，塞紧棉塞，然后用4层纱布罩住棉塞、瓶口扎紧，放在高压灭菌锅内进行消毒，待压力表上升至0.5kg/cm2压力时，即放净冷气待指针降至0后，再关掉放气阀门，待温度表指针逐渐上升至1.1kg/cm2后就开始保温30分钟后，慢慢下降指针至0，然后开盖冷却至常温，再移入接种箱或超净工作台等待接种。
2. 接种方法：先把灭菌后的北虫草液体菌种培养基移放在超净工作台上，并把北虫草母种和接种勾、酒精灯、酒精棉球等接种物品也放在超净工作台上，工作服挂在接种室消毒。然后在接种室点燃烟雾剂（用臭氧消毒器更好），立即关闭所有门窗密闭消毒同时打开紫外线灯。待40min后，将烟雾放净，关闭紫外线灯，接种人员就可进行接种。接种的方法是穿好工作服，打开超净工作台风机，点燃酒精灯，左手拿着母种试管对准火焰口，右手拿着铁勾在酒精灯火焰消毒3-5秒种后立即伸进母种试管内把菌种分成5-7段，再用左手迅速将纱布瓶盖打开，右手立即把一段菌块勾入瓶内（每瓶接入5-6片0.5平方厘米大小菌种）速将瓶盖按原样盖紧。
当北虫草菌种接好后，移入22-24℃恒温培养室，摇床震荡发菌培养。摇床转速140r/min，经过4-6天的发菌培养，经检查北虫草菌液的颜色开始清亮、菌球密集，瓶口闻有很浓的北虫草气味，可判断为菌种优良。如发现发菌瓶内浓度低、气味臭，并有五颜六色的菌液，就是有杂菌污染，坚决不能用。
3. 制作二级摇瓶：培养基同一级，用5000ml三角瓶装量2000ml北虫草液体菌种，灭菌冷却后把一级摇瓶种按10%无菌操作接入大摇瓶，22-24℃，140r/min震荡培养72小时后，菌球大小均匀、密度80%以上，菌液清亮，气味清香、无污染的即为合格菌种。由于5000ml大摇瓶体积较大，用手提高压锅放不下，用大锅又太浪费，为解决大摇瓶灭菌问题，花山食用菌研究所研制了一款100升立式电加热自控高压灭菌锅，一次可灭4个5000的大摇瓶，同时，研制了一次可摇5-7瓶5000ml大三角瓶的摇床，轻便、无噪音、耗能低。
4. 菌种稀释：发好的虫草液体菌种接种前需要稀释以扩大接种规模。稀释倍数依据接种的盘数按5-8倍稀释。用稀释罐稀释时，按液体罐空消、实消操作规程：
（A）发酵罐空消
发酵罐空消（内胆、过滤器、管线的消毒）是对发酵罐进行设备消毒灭菌的过程，对于放置一周不用的发酵罐或者是因为停电使空压机（打气泵）停止运转的发酵罐都需要进行发酵罐的空消操作，具体的操作方法：
（1）关闭发酵罐，除夹套排气门外的所有阀门，拧紧发酵罐罐口盖子。
